Transcript of webinar: Introducing DxFLEX

Dr. Ulrich Sack: Im Zusammenhang mit dieser Präsentation gebe ich die folgenden tatsächlichen oder vermeintlichen Interessenkonflikte bekannt. Ich bin in keinem Unternehmen beschäftigt. Ich habe ein Forschungsstipendium von Beckman Coulter erhalten, das als „Research Support Back Companies“ bezeichnet wird. Ich habe ein Honorar von Becton Dickinson und Beckman Coulter erhalten. Ich habe keine Eigentumsanteile und bin Berater von Akkreditierungsstellen.

Dr. Ulrich Sack: Diese Präsentation wird von Beckman Coulter gesponsert. Der Inhalt ist für Wissenschaft und Lehre gedacht und keine Werbung. Bestimmte Produkte, auf die hier Bezug genommen wird, haben entweder einen spezifischen Verwendungszweck, der vom Hersteller deutlich gekennzeichnet ist, oder sie sind noch nicht CE-gekennzeichnet und daher derzeit nicht für diesen Verwendungszweck verfügbar und werden es möglicherweise auch in Zukunft nicht sein. Ich habe noch keine CE-Kennzeichen erhalten. Derzeit ist eine solche Verwendung nicht verfügbar und wird es vielleicht auch in Zukunft nicht werden.

Dr. Ulrich Sack: Die Ansichten und Meinungen, die in dieser Präsentationen geäußert werden, sind ausschließlich die der Autoren und stellen nicht die Position oder Richtlinie von Beckman Coulter dar. 

Dr. Ulrich Sack: Beckman Coulter übernimmt keine Verantwortung oder Haftung für die Genauigkeit, den Inhalt, die Vollständigkeit, die Rechtmäßigkeit oder die Zuverlässigkeit der dargestellten Informationen.

Dr. Ulrich Sack: Hiermit zeigen wir Ihnen den Inhalt des von uns angebotenen Webinars. Zuerst stelle ich Ihnen kurz die Sauberkeit[?] meines Labors vor. Ich stelle Ihnen meinen DxFLEX-Kollegen von Beckman Coulter, der Ihnen die Vorteile des DxFLEX gegenüber dem alten Aufbau zeigen wird. Was haben wir bei der Übertragung des alten Arbeitsablaufs auf den DxFLEX-Workflow und für dessen Zusammenfassung getan. Anschließend haben Sie Gelegenheit, uns einige Fragen zu stellen. Wie Sie in der Einleitung gehört haben, bin ich klinischer Immunologe. Ich arbeite hier am Institut für Klinische Immunologie in Leipzig. Neben meiner Arbeit im klinischen Labor bin ich technischer Gutachter für die Akkreditierung nach ISO 518917025 und 70043. Ich bin in vielen Forschungsgruppen auf dem Gebiet der Durchflusszytometrie tätig. Was ich für sehr wichtig halte: Ich betreue Doktoranden, und eine dieser Doktoranden ist Anabelle Als[?]. Sie ist Tierärztin und forscht in meinem Labor und sie hat an der Entwicklung dieser Präsentation mitgewirkt.

Dr. Ulrich Sack: Unser Labor ist ein klinisches Durchflusszytometer-Labor. Wir dienen unserem Universitätsklinikum und tragen zu klinischen Studien bei. Wir haben [nicht hörbar] die Patienten, Patienten mit Immundefekten oder mit Verdacht auf Immundefekte, und wir überwachen Patienten, die Immuntherapien erhalten. 

Dr. Ulrich Sack: Unser Labor läuft unter Akkreditierung. Wir haben Flexibilität pro Bereich. Das bedeutet, dass wir ohne zusätzliche Beurteilungen zusätzliche neue Methoden in den Bereich unseres Labors aufnehmen können. Und da wir Laboruntersuchungen anbieten, haben wir in unserem eigenen Institut und natürlich im IVD entwickelt. Wir bieten auch Funktionstests, einschließlich mehrerer Funktionen für Immundefekte und Funktionstests, z. B. [?] im Falle von Funktionalität, an. 

Dr. Ulrich Sack: Und bis jetzt haben wir zwei Durchflusszytometer mit ihren Fluorochromen[?] verwendet. Wir sind mit diesen Durchflusszytometern zufrieden, aber sie sind sehr alt, und es ist jetzt dringend erforderlich, sie zu ersetzen. Und auf der Suche nach einem Ersatz haben wir festgestellt, dass es ein Durchflusszytometer gibt, das eine neuartige Technologie darstellt, nämlich das DxFLEX. Das ist ein DxFLEX, das wir in unser Labor gestellt haben. Es ist ein kleines Gerät. Es gibt keinen Kompressor. In der Tabelle ist ein großer Bildschirm zur Überwachung der Maschine und zur Analyse des Autoloaders der Daten. Er ist sehr klein und es war kein Problem, ihn in unserem Labor für die tägliche Arbeit aufzustellen. Und ich denke, jetzt übergebe ich an meinen Kollegen.

Dr. Carsten Lange: Vielen Dank, Ulrich. Mein Name ist Carsten Lange. Ich bin, wie schon in der Einleitung gesagt wurde, Produktmanager für das DxFlex bei Beckman Coulter. Und bevor wir mit der nächsten Präsentation von Ulrich fortfahren, möchte ich Ihnen ein paar Hintergrundinformationen zu dem System geben.

Dr. Carsten Lange: Also, was ist das DxFlex? Im Wesentlichen ist es klinisch verwandt mit unserem CytoFLEX, einem Durchflusszytometer nur für Forschungszwecke, mit dem die meisten von Ihnen wahrscheinlich bereits vertraut sind. Es hat also einige Merkmale, die das CytoFLEX auch hat. Es verfügt über den gleichen Lasermotor und den integrierten Schwimmer, die zur Erhöhung der Exzitationseffizienz beitragen. Es hat den gleichen Wellenlängenmultiplexer, der die Effizienz der Datenerfassung mit bis zu dreizehn Farben gewährleistet. Es hat ein kompaktes Design, das Ulrich bereits erwähnt hatte. Es hat eine Erfassungsrate von bis zu dreißigtausend Ereignissen pro Sekunde bei siebzigtausend Datenauflösungen. Und eine intuitive Software mit der Bezeichnung „CytExpert for DxFlex“ mit der Kompensationsbibliothek und grafischen Tools, die Ihnen helfen, das Beste aus den Versuchen herauszuholen.

Dr. Carsten Lange: Was sind einige der Hauptmerkmale des DxFlex? Dieses System ist CMR für den klinischen Einsatz für bis zu dreizehn Farben. Es wird in vier verschiedenen Konfigurationen angeboten: mit einem Laser und fünf Farben, mit zwei Lasern und sechs Farben, mit zwei Lasern und neun Farben und mit drei Lasern und dreizehn Farben. Alle diese Konfigurationen sind vor Ort aufrüstbar, so dass es im Grunde nur eine Dongle-Änderung ist, um neue Funktionen freizuschalten, falls Sie eine kleinere Konfiguration dafür erworben haben und später aktualisieren oder aufrüsten möchten. 

Dr. Carsten Lange: Der Autoloader, den Sie hier auf der rechten Seite des Systems sehen, kann zusammen mit dem System bestellt oder später als Zubehörteil gekauft werden. Und dieser Autoloader arbeitet mit einem zweiunddreißigstufigen MCL-Karussell, das Sie auch von anderen Beckman Coulter-Durchflusszytometern wie dem Navios EX kennen. 

Dr. Carsten Lange: Die Software kann mit bis zu fünfundzwanzig Millionen Ereignissen pro Datei arbeiten, und das sind dreizehn Farben oder fünfzehn Kanäle einschließlich Vorwärts- und Seitwärtslichtstreuung, also eine sehr hohe Grenze von Ereignissen pro Datei. Und die neue klinische CytExpert-for-DxFlex-Software hat einige Ergänzungen gegenüber der normalen CytExpert-Software beim CytoFLEX. Wir haben zum Beispiel die Verwendung und die Kontoverwaltung verbessert. Sie finden Vorlagen für Experimente und Berichte, und die wahrscheinlich wichtigste Ergänzung ist die Hinzufügung von Panelexperimenten und die Kennzeichnung der Außer-Bereich-Reserve, die Sie natürlich definieren können. 

Dr. Carsten Lange: Ein großer Vorteil des DxFlex gegenüber herkömmlichen Durchflusszytometern ist die Verwendung von Lawinenphotodioden, den sogenannten APDs. Anstelle der herkömmlichen Photomultiplier, wie hier im Diagramm dargestellt, weisen die APDs im Gegensatz zu PMTs eine lineare Reaktion auf wechselnde Verstärkungseinstellungen auf. Das bedeutet, dass eine Kompensationsmatrix, die bei einer Verstärkungseinstellung erhalten wird, durch einfache Neuberechnungen, die das System natürlich automatisch für Sie durchführt, für das Experiment verschiedene Verstärkungseinstellungen haben kann. 

Dr. Carsten Lange: Dies hat das Potenzial, Ihre Arbeitslast zu vereinfachen, wie Sie hier auf dem links abgebildeten konventionellen PMT-basierten Zytometer sehen können. Immer wenn Sie Einstellungen ändern müssen, müssen Sie den gesamten Satz von Einzelfarbenkontrollen erneut laufen lassen, um die Kompensationsmetriken zu aktualisieren, und dann die eigentlichen Experimente mit den neuen Einstellungen erneut durchführen. Im Gegensatz dazu kann beim DxFLEX die Kompensation automatisch eingestellt werden, wann immer Sie Verstärkungen einstellen müssen. So trägt das DxFLEX mit seiner APD-Technologie wirklich dazu bei, die Einschränkungen von Systemen auf PMT-Basis zu überwinden, die bei hochkomplexen Tests, bei denen der für die Kompensation erforderliche Mittelwert über die lineare Kompensation hinaus wächst, deutlicher zutage treten. Es handelt sich also wirklich um ein großartiges Werkzeug zur Steigerung der Produktivität bei hochfarbigen Durchflusstests.

Dr. Carsten Lange: Es ist wichtig, darauf hinzuweisen, dass das DxFLEX eine Ergänzung zu unserem bestehenden Portfolio an Durchflusszytometern für Klinik und klinische Forschung ist, nicht wirklich ein Ersatz. Wir haben also immer noch das AQUIOS, das Per-Flow- und Go-Zytometer, das die Standardisierung durch Automatisierung einschließlich einiger Probenaufbereitungsschritte verstärkt. Daher sind es idealerweise zwei bis vier hoch standardisierte Routinetests von geringer Komplexität. 

Dr. Carsten Lange: Dann gibt es natürlich noch das Navios EX, das insbesondere im L- und L-Raum, also bei Leukämie und Lymphomen, eine komplette standardisierte Testlösung durch ein integriertes System mit vorgefertigten Panels wie unser ClearLLab-Zehnfarbsystem bietet.

Dr. Carsten Lange: Und nun können wir Ihnen endlich das DxFLEX anbieten, das die späte Technologie wie alle und wie schon früher ergänzt und sich sehr gut für nicht-routinemäßige neu definierte Tests im High-Content-Bereich mit bis zu dreizehn Farben eignet. Damit schließe ich meinen Teil ab und übergebe wieder zurück an Ulrich.

Dr. Ulrich Sack: Vielen Dank. Jetzt möchte ich Ihnen unseren ersten Eindruck über diese Maschine vermitteln. Wir haben festgestellt, dass das DxFLEX ein sehr kleines, kompaktes und leises Gerät ist. Es ist sehr einfach, es in den Laboren, in denen [nicht hörbar] an VTR und die Stromversorgung anzuschließen, und es ist sehr einfach zu installieren. Es ist für die Umgebungsbedingungen sehr einfach. 

Dr. Ulrich Sack: Wir fanden eine schlechte Netzwerkanbindung und einen Barcodescanner. Ein Karussell, einen Loader und ein Einrohr-Vortex. Wir haben in diesem Gerät drei Laser mit Bandpass-Filtern, dreizehn Farben und, wie Sie gerade von meinem Kollegen gehört haben, APDs statt PMTs. Wir fanden, dass die Software sehr leicht zu lernen war, und was für uns als Routinelabor sehr wichtig war, dass alte Panels sehr unkompliziert übernommen werden konnten. Wir konnten unsere etablierten Panels sogar ohne jegliche Änderung in [nicht hörbar] Schritten auf dieses neue Gerät übertragen. 

Dr. Ulrich Sack: Es stehen zahlreiche mehrfarbige Panels zur Verfügung, und was für ein Routinelabor sehr wichtig ist, es gibt eine starke Unterstützung durch Beckman Coulter, und wir hatten Kontakt zu diesen sehr kompetenten Ausbildern, die uns alles erklärten, was wir tun mussten. Wir benutzen diese Maschinen, um Proben in unseren Laboren zu analysieren, so dass wir tägliche Routine haben. Die tägliche Routine ist sehr einfach. Wir haben ein Startprogramm mit destilliertem Wasser, das ungefähr zehn Minuten dauert. Die Qualitätskontrolle, die als Kontroll-Beads bezeichnet wird, um Verzögerungen beim Signalwert zu kontrollieren, dauert ungefähr zwei Minuten, vielleicht etwas mehr, aber sie ist sehr, sehr kurz. Und die tägliche Reinigung, allein die Reinigung mit destilliertem Wasser, ist ein elfminütiges Verfahren.

Dr. Ulrich Sack: Die Software für das DxFLEX ist CytExpert. Diese Software ist mit der Software für Kaluza vergleichbar. Es ist eine sehr transparente Software und es ist einfach, damit umzugehen, wie Sie sehen. Die Plots, die Gating-Strategie, die grundlegenden Informationen, die wir für unser Tagesgeschäft benötigen.

Dr. Ulrich Sack: Die Software, CytExpert, hat verschiedene Fenster, die Sie hier sehen können, eines für die Maschinensteuerung, fünf Zytometereinstellungen und Qualitätskontrolle, die Dot-Plot-Fenster. Es gibt eine Hierarchiestatik im Gating, ein Run-in-[nicht hörbar] Fenster mit automatischen Aufzeichnungsereignissen, einfache Durchflussraten, ein Fenster mit der Probenröhrchenbibliothek, Kompensations- und Trägerinformationen, ein kombiniertes Populationsfenster und Informationen über den Träger.

Dr. Ulrich Sack: Dies ist alles, was man für den täglichen Betrieb des Geräts benötigt. Eine der größten Herausforderungen bei der Einführung einer neuen Durchflusszytometrie ist die Einrichtung eines neuen Panels. Für neue Panelexperimente ist es sehr einfach, eine neue Probe und ein neues Röhrchen einzurichten. Die Optionen in der Leiste sind sehr klar. Es gibt Top-Plot-Zystogramme, verschiedene Gating-Möglichkeiten, eine Kombi-Population mit [nicht hörbar] Gates ist möglich. Dies umfasst die Historie. Bei der Diagnostik verwenden wir sehr oft Kombinationen, damit wir Panel-Kombinationen speichern können. Zum Beispiel können Lymphozyten-Panels und alles in der Panel-Bibliothek gespeichert werden. 

Dr. Ulrich Sack: Ein sehr wichtiger Punkt für ein Routine-Labor ist die Qualitätskontrolle. Das DxFLEX bietet uns einen vollständigen Qualitätskontrollbericht, der elektronisch gespeichert wird und zu einem späteren Zeitpunkt wieder abgerufen werden kann. Alles ist unter Kontrolle, wie es die Vorschriften für ein Routinelabor verlangen.

Dr. Ulrich Sack: Dies ist die Kompensation, wie Sie hier sehen können. Die Kompensationsdaten sind wirklich beeindruckend. Es ist ein sehr, sehr dünner Peak für all diese Beads, die Sie für Ihre [nicht hörbar] Antikörper verwenden können, und diese Kompensationsdateien können später den in diesem Gerät verwendeten Protokollen zugeordnet werden.

Dr. Ulrich Sack: Die Kompensation erfolgt durch negativen und positiven Durchfluss, die miteinander konkurrieren. Es ist sehr einfach zu machen. Dieser Ansatz ist sehr einfach und es können bis zu dreizehn verschiedene Fluorochrome verwendet werden.

Dr. Ulrich Sack: Die Software ähnelt Kaluza. Kaluza ist die einzige Software für einen Forscher, und viele der Postdoktoranden, Doktoranden und Techniker in meinem Labor kennen sich mit der Anwendung von Kaluza aus. Diese Kaluza…, einige zusätzliche Analysen können durchgeführt werden. Dieser Rückgriff auf den Datenaustausch zwischen der DxFLEX-Software und Kaluza kann leicht durchgeführt werden. Es gibt einige zusätzliche Funktionen wie z. B. [nicht hörbar] Menüs. Dies kann zum Beispiel zur Vorbereitung Ihrer Daten für Veröffentlichungen genutzt werden.

Dr. Ulrich Sack: Dies ist die Analyse von acht Peak-Beads, acht Intensitäten jedes Fluorochroms sind hier zu sehen, und diese Beads müssen sehr klar voneinander getrennt sein. Und wie Sie hier sehen, sind diese Peaks sehr deutlich getrennt. Es ist wirklich einfach zu sehen, dass solche Leistungen der Elektronik in diesem Gerät wirklich überlegen sind. Hier sehen Sie es für andere Kanäle. Die Leistung ist fast gleich gut für alle Farben, die wir in diesem Gerät anwenden können. Und hier sind die letzten Peaks. Das ist wirklich eine sehr gute Trennung, und wir sind echt begeistert von der guten Qualität der Analyse. 

Dr. Ulrich Sack: Wir haben versucht, unseren alten Workflow auf das DxFLEX zu übertragen, und es war wirklich beeindruckend, wie einfach das ging. Wir konnten die Protokolle einfach von unserem alten Gerät auf das neue übertragen. Und später haben wir auch versucht, eine neue Röhre einzuführen. Doch zuerst möchte ich Ihnen zeigen, wie wir unsere alten Panels auf die neue Maschine übertragen haben. Wir haben zum Beispiel die Verteilung der Zellen in den Proben analysiert. Diese bekannte Konzentration oder Anzahl von Zellen ist hier zum Beispiel ein Ergebnis für CD4. Dies ist das Ergebnis des vorherigen Geräts, es ist das Ergebnis des DxFLEX, und die Koagulation zwischen beiden Geräten erwies sich als überlegen mit sehr, sehr guter Koagulation.

Dr. Ulrich Sack: Das Gleiche wurde bei den anderen Zellpopulationen festgestellt. Es gab nahezu keine Veränderung im Ergebnis zwischen der alten und der neuen Einstellung. Hier sehen Sie beispielsweise die Unterscheidung der B-Zellen, das Gate, das Sie hier sehen, ist genau dasselbe, was wir von anderen Maschinen kennen, aber die Optionen, die wir hier auf die Analyse anwenden können, werden später noch vorgestellt, aber für den Anfang war es sehr einfach, diese Beads des Panels von dem alten Gerät auf das neue zu übertragen.

Dr. Ulrich Sack: Dies sind die Differenzierungen, die hier gezeigt werden. Sie kennen wahrscheinlich diese Differenzierung in einigen Populationen, sie sieht ähnlich aus wie die vorherige Einstellung und die Ergebnisse sind sehr vergleichbar. Die direkte Analyse ist die gleiche, sofern es keinen Unterschied zur alten Einstellung gibt, die wir in unserem Labor hatten. Nach dem Transfer aller alten Panels von dem alten Gerät auf das neue, war die zweite Frage natürlich, inwieweit wir neue Panels in neue Geräte einführen können, die für diese neuen Optionen dieses Geräts optimiert sind. Und wir haben versucht, zuerst ein Panel dieser elf Antikörper und acht Farben auf diesem neuen Gerät anzuwenden, das so analysiert werden kann, wenn es viele zusätzliche mathematische Verfahren erfordert, um Marker hinzuzufügen und zu kombinieren, um viele Populationen herauszufinden, und hier werde ich Ihnen die endgültigen Zusammensetzungen und Plots zeigen. Wir können dieses Röhrchen analysieren. Lymphozyten, Granulozyten, sind Populationen. Monozyten, [nicht hörbar] Differenzierung, [nicht hörbar] und Aktivierung, B-Reifung und K-Reifung und Aktivierung, und Monozyten sind Populationen. All diese Populationen sind in diesem Röhrchen zu finden, und wir wenden noch nicht dreizehn verschiedene Farben an. Wir beschränken uns nur auf acht Farben, aber wir wollen das große Potenzial sehen, wie wir viele verschiedene Zellpopulationen in einem einzigen Röhrchen analysieren können.

Dr. Ulrich Sack: Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die Genauigkeit und die Haftung der Maschine sehr gut sind. Die Acht-Peak-Bead-Analyse zeigt die enormen Möglichkeiten der nahezu perfekten Peaktrennung, die ausgewerteten Daten sind fast immer mit den sekundären zwei Daten vergleichbar, und wenn das nicht geht, handelt es sich in der Regel um ein Gating-Problem. Die Instrumente haben gewöhnlich ein sehr geringes Tiefenvolumen, daher wird nur wenig der Proben verbraucht und kann weiter verwendet werden. Bisher hatten wir kaum Probleme bei der Handhabung und [nicht hörbar] natürlich sagt uns die Software meist ganz klar, was falsch ist und wie man das Problem beheben kann. Was die Leistung als Lawinenphotodioden-Detektoren über APDs betrifft, so lässt sich sagen, dass sie mindestens so empfindlich wie das CytoFLEX ist, und wir rechnen damit, die mit den PMT-basierten Systemen verknüpften Einschränkungen zu überwinden.

Dr. Ulrich Sack: Die Anwendbarkeit der Benutzerschnittstelle, ihre Phase ist sehr gut. Nach der Einarbeitungszeit mit der Software ist sie sehr benutzerfreundlich. Die Kollegin, die das Gerät in unserem Labor bedient, hatte nicht allzu viel Erfahrung in der Durchflusszytometrie. Sie brauchte eine sehr kurze Einarbeitungszeit von etwa einer Woche, um sich mit der allgemeinen Handhabung vertraut zu machen, und jetzt, nach einem Monat, ist sie absolut perfekt im Umgang mit diesem Gerät. Es ist sehr klar, wie man die Benutzerschnittstelle benutzt. Es gibt nicht zu viele versteckte Funktionen, und für eine Variation von diagnostischen Proben ist sie wirklich sehr gut. Für komplexere Panels und für Forschungsanwendungen ist es sehr gut, Software innerhalb des DxFLEX mit Optionen des Kaluza-Softwaresystems zu kombinieren.

Dr. Ulrich Sack: Automatisierte Qualitätskontroll- und Standardisierungsverfahren sind wirklich perfekt und in Kombination mit einer Kompensationsbibliothek ist die Anwendung leicht, um hochwertige Ergebnisse für Routinelabors für die tägliche Qualitätskontrolle zu verwenden, grundlegende Qualitätskontrollbits haben immer funktioniert, bis auf einmal, und dieser einmalige Service hilft uns sofort. Wenn ein Problem auftritt, kann es normalerweise mit einer Tiefenreinigungsfunktion behoben werden. 

Dr. Ulrich Sack: Die Standardisierung der Instrumente geht sehr schnell, die Dateien können an anderer Stelle leicht neu analysiert werden und es ist sehr einfach, sogar Fehler von Bedienern mit sehr wenig Erfahrung auf diesem Gebiet zu beheben. Die Panel-Bibliothek und die Kompensationsbibliothek stehen zur Verfügung, um die Dateien zu speichern und auf Ihre Analyse anzuwenden. Wir sind also mit diesem Gerät sehr zufrieden. Ich möchte Annabel für die Bereitstellung von Material für diese Präsentation danken. Jetzt sind wir bereit, Ihre Fragen zu beantworten. Vielen Dank.

Moderator: Vielen Dank, Dr. Sack und Dr. Lange für diese Präsentation. Unsere erste Frage betrifft die Umsetzung des DxFLEX in Ihrer Laborumgebung. Bei der Einführung dieses neuen Zytometers transferiere ich also einfach mein bestehendes Panel, oder werden normalerweise auch neue Panels eingerichtet? 

Dr. Ulrich Sack: Dies ist tatsächlich der Fall. Als wir das DxFLEX in unserem Labor eingeführt haben, konnten wir also einfach die bereits vorhandenen Panels von unserem vorherigen Gerät auf das DxFLEX übertragen. Natürlich bietet dieses Gerät eine Menge zusätzlicher Optionen. Aber wenn Sie eine neue Maschine und neue Testserien einführen müssen, ist es für den leitenden Direktor wirklich von Vorteil, wenn Sie einfach damit beginnen können, alte Panels auf das neue Gerät zu übertragen, und nicht mit einer parallelen Validierung all Ihrer Panels und der Einführung der neuen Maschine beginnen müssen. Es macht die Sache also leichter. 

Moderator: Gibt es eine spezielle Schnittstelle für die LIMS-Konnektivität auf diesem Gerät? 

Dr. Carsten Lange: Nein, das DxFLEX bietet eine unidirektionale LIMS-Konnektivität, indem Daten automatisch exportiert werden können, z. B. als CSV-Datei, und diese können dann mit Hilfe einer Middleware-Lösung an das LIMS-System übertragen werden. Oder alternativ könnten Sie unsere eigene Kaluza-C-Software und auch für die Analyse der vom Experten vor Ort exportierten Daten verwenden und diese Software für die Übertragung der Daten an das LIMS nutzen. 

Moderator: Damit hängt auch die folgende Frage zusammen: Wenn ein Benutzer über eine Datensammlung in Excel verfügt, kann er dann DxFLEX-Daten problemlos in diese bestehende Datenbank übertragen?

Dr. Carsten Lange: Genau. Es ist grundsätzlich das Gleiche. Sie können automatisch als CSV-Datei in Excel exportieren. 

Moderator 1: Können Sie erläutern, wie das DxFLEX vor Ort aufgerüstet werden kann? Wenn ein Benutzer die Mindestkonfiguration kauft, aber später feststellt, dass er weitere Kanäle hinzufügen muss. 

Dr. Ulrich Sack: Oh ja, im Grunde enthält jedes gelieferte DxFLEX bereits die gesamte Hardware für bis zu dreizehn Farben. Jedes gelieferte Gerät verfügt also über kostenlose Laser und alle Detektoren für bis zu dreizehn Farben. Grundsätzlich ist also alles, was Sie brauchen, eine USB-Dongle-Änderung, die neue Hardware-Funktionen freischaltet. Das kann also im Prinzip von jedem Servicetechniker im Außendienst innerhalb von ein oder zwei Minuten durchgeführt werden. 

Moderator: Wie ist die Empfindlichkeit im Vergleich zu vorhandenen PMT-Geräten?

Dr. Carsten Lange: Nach unserer Erfahrung ist die Laborempfindlichkeit überlegen. Wir haben begonnen, viele Experimente zu wiederholen, bei denen wir mit diesem Gerät keinen wirklich relevanten Unterschied zwischen negativen und positiven Signalen finden konnten, und somit die Auflösung höher ist und wir erhalten sehr klare Signale. Aus Sicht eines Benutzers ist es also wirklich ein wunderbares Gerät für solche Anwendungen. 

Dr. Ulrich Sack: Ja, und wenn ich dem vielleicht noch etwas hinzufügen darf: Das DxFLEX wurde mit unserem DURAClone B27 und damit HLA B27 validiert. Im Vergleich zum FC 500-Instrument waren die meisten Proben konkordant. Aber für die wenigen diskordanten Proben, die tatsächlich positiv auf dem DxFLEX und negativ auf dem FC 500 waren, haben wir eine diskordante Auflösung mit einem LDT durchgeführt und festgestellt, dass in allen Fällen, in denen LDT-Daten verfügbar waren, die DxFLEX-Daten korrekt waren, was auf höchste Empfindlichkeit des DxFLEX hinweist.

Moderator: In Bezug auf die Anforderungen an die Software: Ist die Software, die zum DxFLEX gehört, auch CE-IVD?

Dr. Ulrich Sack: Die CytExpert-Software gehört zu dem Gerät, und es ist ein CE-IVD-Gerät. Dies ist CE-IVD-Software. Es ist also ein Paket und funktioniert sehr gut. Es ist eine vollständig CE-IVD-zertifizierte Software. 

Dr. Carsten Lange: Und außerdem möchte ich darauf hinweisen, dass wir nicht nur die CE-Kennzeichnung für das Gerät haben, es ist wirklich das DxFLEX CE-IVD-System. Es ist also das Instrument zusammen mit der Software und auch alle Systeme, bis die [nicht hörbar] QK-Beads sauber durchfließen. Sie sind alle [nicht hörbar]. 

Moderator: Vielen Dank. Verfolgt das Instrument beim Tracking der Qualitätskontrolle nur die Beads oder verfolgt es auch interne Prozesskontrollen? 

Dr. Carsten Lange: Zurzeit verfolgt es nur die QK-Beads. Das ist etwas, zu dem wir sogar von den frühen Einsatzorten Rückmeldungen erhalten haben, und wir prüfen, ob wir dies ausweiten können, aber derzeit sind es tatsächlich nur die QK-Beads.

Moderator: Ist es auch möglich, 96-Well-Platten für die Messungen mit diesem Gerät zu verwenden? 

Dr. Ulrich Sack: Ja. Das ist in der Tat möglich. Wie Sie vielleicht auf Bildern gesehen haben, hat das DxFLEX den Autoloader auf der rechten Seite der Geräte, die normalerweise ein Karussell aufnehmen. Es gibt eine Option für einen Plattenadapter für diesen Autoloader, der U- und V-Platten mit flachem Boden, jedoch keine Deep-Well-Platten, aufnimmt, aber Sie haben einige Optionen für 96-Well-Platten. Ich muss Sie jedoch darauf aufmerksam machen, dass die Option für den Plattenlader nur den RUO-Status hat. Dieser ist also nicht CE-gekennzeichnet.

Moderator: Könnten Sie bitte noch etwas genauer erklären, wie diese DxFLEX-Normalisierungsproben …?

Dr. Carsten Lange: Ulrich, würden Sie das übernehmen?

Dr. Ulrich Sack: Ich bin mir nicht sicher, was Sie mit dieser Normalisierungsprobe meinen. Also, das System ist sehr stabil und ergibt jedes Mal die gleichen Ergebnisse. Ich bin nicht ganz sicher, was Sie mit dieser Normalisierung in diesem Kontext meinen. Tut mir leid.

Moderator: Das ist verständlich. Das ist etwas, was wir mit der Person, die gefragt hat, besprechen können. Machen wir vielleicht erst mal weiter … 

Dr. Carsten Lange: Aber vielleicht kann ich an diesem Punkt … Mit dem DxFLEX ist es nicht notwendig, zusätzliche Anstrengungen zu unternehmen, um Ergebnisse von verschiedenen Maschinen zu vergleichen. Das DxFLEX liefert also ein sehr stabiles Ergebnis, unabhängig davon, auf welchem Gerät man arbeitet, und so ist eine sehr gute Vergleichbarkeit möglich zwischen DxFLEX-Geräten an verschiedenen Orten und das ist sehr gut für [nicht hörbar] zentrale Studien.

Moderator: Vielen Dank. Welche Software verwenden Sie zurzeit? Mussten Sie eigene Software für Ihre Forschung entwickeln? 

Dr. Ulrich Sack: Im Moment verwenden wir verschiedene Softwaresysteme, je nach Anwendung für Routinelabor und CE-IVD und für die Forschung zum Beispiel FlowJo, aber für die Übertragung der Ergebnisse vom DxFLEX zu unserem Forschungszweck werden die Ergebnisse direkt an Kaluza übertragen. Und das ist sehr einfach zu handhaben. Also kein Problem. 

Moderator: Können Sie uns einige Informationen zur Testserienbericht-Option geben? Hat diese die gleichen Funktionen wie das SP 500 Navios?

Dr. Carsten Lange: Die Option Untertestserienbericht bietet Ihnen alle Funktionen, die Sie für ein Routinelabor und auch für ein Forschungslabor benötigen. Komplette Gating-Strategie, Subpanels, Antikörper, Labels, alles, was Sie mit Ihrem Panel definieren, wird in den Berichten angezeigt, wenn Sie dies wollen.

Moderator: Haben Sie Daten zum Vergleich zwischen dem DxFLEX und dem Navios EX? 

Dr. Ulrich Sack: An einen aktuellen Vergleich habe ich noch nicht gedacht, weil wir kein Navious EX besitzen. Carsten, haben Sie Vergleichsdaten?

Dr. Carsten Lange: Nichts, was Beckman-intern ist und offizielle Validierungsdaten darstellt. Das ist also etwas, was wir gemeinsam mit externen Laboren erstellen müssten.

Moderator: Kann mit diesem Gerät auch Biosimilar-Forschung durchgeführt werden?

Dr. Ulrich Sack: Ja, Sie können dies tun, aber es gibt keine IVD-Testkits für die Biosimilar-Forschung. Für die Forschung muss man natürlich eigene Panels erstellen. Wir forschen sehr viel im Bereich der Antikörpertherapien, und das kann man mit diesem Gerät leicht machen. 

Dr. Carsten Lange: Genau, und ich wollte nur sagen, dass es natürlich auch das CytoFLEX RUO-Durchflusszytometer gibt, das unsere Forschungsplattform wäre, die für die Biosimilar-Forschung verwendet werden kann. Aber natürlich verfügt das DxFLEX im Wesentlichen über alle Funktionen, die das CytoFLEX hat, plus eine Reihe von Software-Optionen und Funktionen, die in einer klinischen Umgebung benötigt werden. Daher können Sie das DxFLEX auf jeden Fall für diese Art von Forschung verwenden. 

Moderator: Haben Sie Erfahrung mit MRD-Tests auf dem DxFLEX und ist das Gerät schnell genug, um die große Anzahl von Ereignissen zu analysieren, die erforderlich sind? 

Dr. Ulrich Sack: Auch dies ist etwas, das von der Beckman-Seite nicht offiziell validiert wurde. Daher kann ich dies nicht kommentieren. Natürlich gibt es keine Softwarebeschränkungen in Bezug auf die aufgezeichneten Ereignisprofile. Die Obergrenze liegt hier also bei 25 Millionen Ereignissen pro Profil für alle dreizehn Farben. Aus dieser Perspektive ist es also gut geeignet. Die maximale Erfassungsrate beträgt dreißigtausend Ereignisse pro Sekunde. Ich würde also sagen, dass es aus dieser Perspektive gut geeignet ist. 

Moderator: Wie gehen Sie mit Spillover bei diesem Gerät um? Kommt dies bei dieser Technologie häufig vor? 

Dr. Carsten Lange: Ich meine, das ist immer die untere rechte Seite und die APD verhindert Spillover nicht. Ich denke, und wir versuchen dies in den Folien zu erklären, der Hauptunterschied liegt wahrscheinlich darin, dass die Kompensation, die sich mit Spillover befasst, viel einfacher und weniger zeitaufwändig ist als bei herkömmlichen PMT-basierten Durchflusszytometern. Ulrich, was würden Sie sagen?

Dr. Ulrich Sack: Es gab bei uns keine besonderen Probleme damit. Tatsächlich sind wir in der Lage, ein Dreizehn-Farben-Panel in diesem Gerät durchzuführen, aber ein bisschen Spillover muss jedes Mal berücksichtigt werden und ich kann es nicht ausschließen.

Moderator: Diese Frage richtet sich an Professor Sack. Hatten Sie die Möglichkeit, die Leistung von 13-Farben-Leukämie-Panels auf dem DxFLEX zu beurteilen?

Dr. Ulrich Sack: Leider noch nicht, denn unser Labor ist ein immunologisches Labor und wir haben ein Partnerlabor, das sich mit Hämatologie befasst und es gibt eine strikte Trennung zwischen den Subpanels, mit denen wir arbeiten. Nein, leider nicht.

Moderator: Wie gut ist die Leistung dieses Geräts im Vergleich zu den älteren Modellen bei der Durchführung von Lymphozyten-Crossmatch für Organtransplantationspatienten? Sie haben irgendwelche Daten dazu?

Dr. Carsten Lange: Dies ist nicht die Spezialisierung unseres Labors, aber im Allgemeinen ist die Leistung einiger Maschine sehr gut. Es ist ein sehr schnell zu bedienendes Gerät mit sehr kurzen Zeiten in der Vorbereitung und in der Reinigung nach dem Gebrauch. Bei uns war die Leistung hervorragend. 

Moderator: Haben Sie bereits einmal versucht, auf diesem Gerät mit FlowDSA-XM-Reagenzien von One Lambda zu arbeiten? Wie ist die Empfindlichkeit und Genauigkeit in Bezug auf die Bestimmung des MCS-Bereichs-Cutoffs?

Dr. Ulrich Sack: Ich habe leider keine Daten zu diesem Punkt.

Moderator: Das ist in Ordnung. Warum wird dreizehn Farben immer mit eckigen Klammern geschrieben?

Dr. Carsten Lange: Weil es nur eine Option ist. Man muss auch dreizehn Farben laufen lassen und manchmal kann es besser sein, zur besseren Trennung einige Positionen frei zu lassen. Aber wir können generell dreizehn verschiedene Farben mit dieser Maschine laufen lassen. Wir haben es in einigen experimentellen Panels ausprobiert. 

Moderator: Jemand hat gefragt, ob Sie bitte den APD-Mechanismus genauer erklären können.

Dr. Ulrich Sack: Das würde wahrscheinlich den größten Teil der Fragerunde in Anspruch nehmen, wenn nicht sogar mehr. Ich würde Sie gerne zur näheren Erklärung an unsere Webseite verweisen, wo wir mindestens zwei Technologievideos haben, die sich mit der APD-Technologie im DxFLEX beschäftigen. 

Moderator: Ist mit dem DxFLEX eine volumetrische Zählung möglich? 

Dr. Ulrich Sack: Ja und nein. Es ist nicht CE-IVD. Es ist im Rahmen der klinischen Studie nicht validiert. Es ist eine RUO-Funktion, die jedoch in der Software verfügbar ist.

Moderator: Eine Frage aus dem Publikum bezieht sich im Wesentlichen auf die Kosten der Ausgabe und auf die Art der verfügbaren Assays und wie die Kosten pro Test aussehen? 

Dr. Carsten Lange: Für das eigentliche Gerät stehen mehrere Optionen zur Verfügung. Daher ist es schwierig, einen bestimmten Preis anzugeben, selbst einen Listenpreis. Wir haben vier verschiedene Konfigurationen und zwar mit und ohne Auto-Loader. Die Basiskonfiguration, also das Fünffarbengerät ohne Autoloader, beginnt bei rund 80.000 Euro als Listenpreis, glaube ich. Aber natürlich hängt es davon ab, welche genaue Konfiguration Sie haben möchten und welche anderen Geräte oder Reagenzien Sie bei uns kaufen. Was das Testmenü in Bezug auf die Preisgestaltung betrifft, so ist das auch sehr subjektiv. Wissen Sie, es hängt von einer Reihe von Faktoren ab, in der Regel gibt es so etwas wie einen Liefervertrag für nicht nur einen Test. Deswegen ist es schwer, hier einen genauen Preis zu nennen. Bezüglich validierter Assays ist der einzige Assay, der derzeit validiert ist, das DURAClone B27-Kit, und das ist, wie ich auf der einen Folie sagte, weil der DxFLEX derzeit eher als LDP-Gerät im Bereich der hochkomplexen Tests gedacht ist. Dagegen sind wir immer noch der Meinung, dass das Navios EX die Hauptstütze in der eher standardisierten Testumgebung ist, wo wir mehr fertige Assays zur Verfügung haben.

Moderator: Vielen Dank. Ein Benutzer sagt, dass er derzeit das Navious EX verwendet, und fragt, ob er beim Umstieg auf ein DxFLEX viele Änderungen an seinen bereits etablierten Panels vornehmen muss. 

Dr. Ulrich Sack: Ich gehe nicht davon aus, außer in ganz wenigen Ausnahmen. Diese Panels können ohne Änderungen an der DxFLEX übertragen werden. 

Moderator: Wie waren die Daten [nicht hörbar] -Behinderung bei langen Durchläufen. Die Tests laufen also etwa sechs Monate und wie wirkt sich das auf die Stabilität der Leistung der APDs aus?

Dr. Ulrich Sack: In unserem Labor hatten wir die Möglichkeit, das Gerät für jetzt sieben Monate zu verwenden und wir haben keine Verschiebungen gefunden, die die Ergebnisse in unseren Experimenten beeinflussen. Wir haben also festgestellt, dass es sehr stabil ist, aber wir haben keine längeren Erfahrungen.

Moderator: Ist die DxFLEX-Software 21-CFR-Part-11-konform?

Dr. Carsten Lange: Aktuell ist sie das nicht. Das ist also eine Funktion, die normalerweise eher in der Biopharma-Forschung eingesetzt wird, und hier positionieren wir typischerweise unsere CytoFLEX RUO-Plattform, die CFR-21-Part-11-konform ist.

Moderator: Eine Frage ist, wie Sie entscheiden, welche Verstärkungseinstellungen für die Panels auf dem DxFLEX optimal sind.

Dr. Carsten Lange: Verstärkungseinstellungen sind typisch für Photomultiplier-Spots. Hier haben wir APD, daher bin ich mir nicht ganz sicher, wie man das hierauf anwenden kann. Die Einstellungen werden auf eine andere Art und Weise durchgeführt, weil es sich um ein vollelektronisches Gerät und nicht um eine Photomultiplier-Röhre handelt.

Moderator: Vielen Dank. Damit haben wir jetzt das Ende unserer Zeit für Fragen erreicht. Ich möchte mich bei Prof. Dr. Ulrich Sack vom Institut für klinische Immunologie der Universität Leipzig und bei Dr. Carsten Lange von der Beckman Coulter GmbH dafür bedanken, dass sie sich Zeit genommen haben, uns dieses Webinar über das neue DxFLEX-CE-IVD-Durchflusszytometer für Routine- und klinische Forschungslabore vorzustellen. Alle Fragen, die nicht zur Sprache kamen, werden wenn möglich per E-Mail beantwortet. Diese Präsentation wurde von der Beckman Coulter GmbH in Zusammenarbeit mit Wiley Current Protocols gesponsert und wird auf der Current Protocols Website unter www.currentprotocols.com im Bereich Webinare unter Ressourcen verfügbar sein. Vielen Dank für Ihre Teilnahme.


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