Stabile Leistungseigenschaften
Ein wesentliches Ziel des Hinzufügens eines Viabilitätsfarbstoffs zum Testseriendesign ist es, die Unterscheidung toter Zellen von nachfolgenden Gates zu ermöglichen. Tote Zellen binden Antikörper-unspezifisch, was die Populationsanalyse verfälschen kann. Wenn das Reagenz an Wirksamkeit verliert, wird die Anfärbung reduziert, was dazu führt, dass mehr tote Zellen als lebendig erscheinen. Oder wenn die Anfärbung übermäßig stark ist, werden mehr Zellen tot erscheinen. Für eine robuste Assay-Leistung sind konsistente stabile Reagenzien erforderlich.
Beckman Coulter charakterisiert die Qualität unserer Reagenzien ausnahmslos. Mehrere Chargen jedes Reagenzes werden von mehreren Bedienern getestet, um die empfohlene Anfärbekonzentration und Inkubationszeit zu bestimmen. Jede neue Charge wird bewertet, um sicherzustellen, dass die festgelegten QC-Parameter eingehalten werden.
| ViaKrome 405 | ViaKrome 561 | ViaKrome 638 | ViaKrome 808 | |
|---|---|---|---|---|
| Versuch 1 | 19,6 | 19,8 | 21,2 | 15,5 |
| Versuch 2 | 19,3 | 23,9 | 21,8 | 17,9 |
| Versuch 3 | 21,0 | 20,6 | 22,9 | 17,0 |
| Versuch 4 | 17,4 | 24,0 | 17,8 | 16,3 |
| Mittelwert in % der toten Zellen | 19,3 | 22,1 | 20,9 | 16,7 |
| SD | 1,5 | 2,2 | 2,2 | 1,0 |
| CV% | 7,6 % | 9,9 % | 10,6 % | 5,9 % |
Assay-Präzision. Eine Mischung aus Jurkat-Zellen und hitzebelasteten (55 °C für 10 Minuten) Jurkat-Zellen wurden mit dem genannten ViaKrome Fixable Viability-Farbstoff angefärbt. Die Proben wurden unmittelbar nach der Anfärbung entnommen (n = 4). Die tote Zellpopulation in Prozent wird angegeben und eine statistische Analyse der Variation wird angezeigt. Der Proben-CV reichte von 5,9 bis 10,6 %.
Stabilität bei 18-25° ViaKrome 405 fixierbarer Viabilitätsfarbstoff
Stabilität bei 18-25° ViaKrome 561 fixierbarer Viabilitätsfarbstoff
Stabilität bei 18-25° ViaKrome 638 fixierbarer Viabilitätsfarbstoff
Stabilität bei 18-25° ViaKrome 808 fixierbarer Viabilitätsfarbstoff
Stabilität der Stammlösung. Der angegebene ViaKrome fixierbarer Viabilitätsfarbstoff wurde in PBS rekonstituiert und sofort (0 Stunden) verwendet oder bei 18-25 °C für die angegebene Zeit bis zu 4 Tage (96 Stunden) lichtgeschützt gelagert. Eine Mischung aus Jurkat-Zellen und hitzebelasteten (55 °C für 10 Minuten) Jurkat-Zellen wurden gefärbt und die Daten wurden mit dem CytoFLEX LX Durchflusszytometer erfasst. Die Grafik zeigt den Prozentsatz der toten Zellen (Balken) und das Signal-Rausch-Verhältnis (Linie) für jeden Zeitpunkt. Beide Maße bleiben über den untersuchten Zeitraum konsistent.
