ViaKrome fixierbare Viabilitätsfarbstoffe - Protokoll

Materialien

  • Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung
  • Fötales Rinderserum
  • PerFix-nc Reagenz 1, 2 und 3 (Bestellnummer B10825)
  • PBS mit 0,5 % Formaldehyd

Zell-Linien

  1. Verwenden Sie Zelllinien mit 5 x 106 Zellen pro ml, 100 μl pro Test (5 x 105 Zellen pro Test)
  2. 2,5 ul* ViaKrome fixierbarer Viabilitätsfarbstoff hinzufügen
  3. Vortexen
  4. Bei 18–25 °C für 20 Minuten inkubieren, dabei vor Licht schützen
  5. 3 ml PBS 1X hinzufügen
  6. 5 Minuten lang bei 300 g zentrifugieren
  7. Überstand ansaugen
  8. 500 μl von PBS 1X / Formaldehyd 0,5 % hinzufügen
  9. Daten mit einem Durchflusszytometer erfassen

*Für die Verwendung mit anderen Protokollen und/oder Proben wird eine Titration des ViaKrome fixierbaren Viabilitätsfarbstoffs empfohlen, um die optimale Dosis zu ermitteln.

Typische Zelllinienfärbung ViaKrome fixierbare Viabilitätsfarbstoffe

Repräsentative Anfärbungen mit ViaKrome fixierbaren Viabilitätsfarbstoffe. Bi-parametrische Darstellung (Seitwärtsstreuung versus Fluoreszenzintensität) der Anfärbung einer Mischung unbehandelter Zellen (lebende Zellen) und wärmebehandelter Jurkat-Zellen (tote Zellen). Die Erfassung erfolgt mit einem Durchflusszytometer der Serie CytoFLEX LX N-V-B-Y-R-I und die Emission wurde über den angegebenen Bandpass-Filter erfasst. ViaKrome 405 Farbstoff wurde mit dem Violett-Laser (405 nm) angeregt, Tafel A, ViaKrome 561 Farbstoff wurde mit dem Gelb-Grün-Laser (561 nm) angeregt, Tafel B, ViaKrome 638 Farbstoff wurde mit dem Rot-Laser (638 nm) angeregt, Tafel C, und ViaKrome 808 wurde mit dem Infrarot-Laser (808 nm) angeregt, Tafel D.

Mononukleare Zellen des peripheren Blutes (PBMCs)

  1. 2,5 μl des ViaKrome fixierbaren Viabilitätsfarbstoffs in 50 µl PBMCs zu 10 x 106 Zellen/ml hinzufügen
  2. Vortexen
  3. Bei 18–25 °C für 20 Minuten inkubieren, dabei vor Licht schützen
  4. 3 ml PBS 1X hinzufügen
  5. 5 Minuten lang bei 150 g zentrifugieren. Überstand durch Ansaugen entfernen
  6. 50 μl Fötales Rinderserum hinzufügen. Vortexen, bis das Pellet aufgelöst ist.
  7. Mit der intrazellulären Färbung fortfahren

*Für die Verwendung mit anderen Protokollen und/oder Proben wird eine Titration des ViaKrome fixierbaren Viabilitätsfarbstoffs empfohlen, um die optimale Dosis zu ermitteln.

Typische Zelllinienfärbung mit ViaKrome fixierbaren Viabilitätsfarbstoffen

Repräsentative Anfärbungen mit ViaKrome fixierbaren Viabilitätsfarbstoffe. Bi-parametrische Darstellung (Seitwärtsstreuung versus Fluoreszenzintensität) der Färbung von peripheren mononukleären Blutzellen (PMBC). Die Erfassung erfolgt mit einem Durchflusszytometer der Serie CytoFLEX LX N-V-B-Y-R-I und die Emission wurde über den angegebenen Bandpass-Filter erfasst. ViaKrome 405 Farbstoff wurde mit dem Violett-Laser (405 nm) angeregt, Tafel A, ViaKrome 561 Farbstoff wurde mit dem Gelb-Grün-Laser (561 nm) angeregt, Tafel B, ViaKrome 638 Farbstoff wurde mit dem Rot-Laser (638 nm) angeregt, Tafel C, und ViaKrome 808 wurde mit dem Infrarot-Laser (808 nm) angeregt, Tafel D.

 

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