Warum sollten Sie einen Viabilitätsfarbstoff verwenden?

Tote Zellen binden Antikörper unspezifisch und verfälschen die Berechnung des Prozentsatzes an positiven Ergebnissen. Bei toten Zellen nimmt außerdem die Autofluoreszenz zu, was die Erkennung spezifischer Signale stört.  Das Eliminieren abgestorbener Zellen sollte vor der Populationsanalyse durch sequenzielles Gating abgeschlossen werden.

Vergleich der Probenanalyse ohne und mit Ausschluss toter Zellen. Aufgetaute PBMCs wurden vor der Immunfärbung ohne (A) oder mit (B) der Zugabe von ViaKrome 405 fixierbarem Viabilitätsfarbstoff durch Hitze (55 °C für 10 Minuten) belastet. Die Zellen wurden dann mit dem Perfix-nc Cellular Staining Vorbereitungs-Kit (Bestelltnummer B10825) bearbeitet und mit Granzyme B-FITC, CD19-PE, CD14-ECD, CD79a-PC5.5, CD3-PC7 und CD45-Krome Orange angefärbt. Die Daten wurden mit dem Durchflusszytometer der Serie CytoFLEX LX N-V-B-Y-R-I erfasst und mit der Software Kaluza Analysis analysiert.  Gate-Statistiken zeigen den prozentualen Anteil der übergeordneten Population und unterscheiden sich in den beiden Bedingungen, die den Effekt der Eliminierung toter Zellen vor dem sequentiellen Gating zeigen.